Štúdia IHC - pomoc pri lúštení biológii rakoviny prsníka

Napriek tomu, že stále viac a viac kliniky začínajú používať metódy genetického fenotypizáciu nádorov IHC štúdie, ktorou je dodnes hlavným nástrojom v rozlúštenie biológii rakoviny prsníka, predpovedať jeho budúci vývoj, "predpovedať" odpovede nádoru na plánovanú liečbu.

V tomto článku sa dozviete, čo je imunohistochemická (IHC) štúdie, význam IHC má rakovinu prsníka.

Histochemie (sekcia v histologické farbenie)

Pred patológ (morfológia) začína pod mikroskopom časť prsného tkaniva získaného biopsiou, treba farbiť jeho špeciálnej farbivá.

Histochemické použitých farbív na tenké časti miesta tkaniva vidieť pod mikroskopom, bunky, ktoré sú prítomné tam, ich usporiadanie vo vzťahu k sebe navzájom (štruktúra tkaniva). Svetelná mikroskopia je rutinná metódou pre štúdium zafarbených tkanivové rezy, široko používané v diagnostike rakoviny prsníka. Najbežnejšie sekcie farbenie tkaniva za použitia:

• Hematoxylin - to farbí jadro buniek v tmavo modrej farbe;
• Eozín - čo ružové cytoplazmy buniek. ich zdieľanie s hematoxylín-eozín nazýva farbenie.

Čo je imunohistochémia (IHC)

Patológ - lekár, ktorý už dlho študoval na Lekárskej univerzite, vedieť, ako používať mikroskopu rozlíšiť farebného rakovinové bunky úseky od normálneho tkaniva. Zvyčajne sa diagnóza (benígne alebo malígne patológie) postačí uvažovať pod mikroskopom tkanivových rezoch zafarbených hematoxylínom a eozín. Ale niekedy to nestačí. V tejto situácii, je podpora je imunohistochémia, ktoré morfologické identifikáciu buniek a tkanív pridáva imunologickú zložkou.

Metóda imunohistochémia (IHC) detekcia morfologických doplnkov buniek a tkanív s použitím protilátok proti známym antigénom, ktoré sú špecifické pre určité typy buniek alebo bunkových zložiek. Umiestnenie týchto protilátok je možné vidieť použitie svetelnej mikroskopie, pretože protilátky obsahujú vizuálne rozpoznať značku.

Prvá analýza technikou imunohistochemické karcinómu prsníka s použitím protilátok s pripojenými fluorescenčnými značkami, ktoré vyžaduje použitie špeciálneho fluorescenčným mikroskopom, čo umožňuje lokalizáciu týchto protilátok pozri rez v prsnom tkanive.

V priebehu posledných 30 rokov sa výrazne zjednodušiť postup, ktorý sa používa pre výskum rakoviny prsníka IHC za použitia špecifických protilátok (monoklonálna protilátka) sa enzymatické značky. Toto, podľa poradia, dovolil použitie svetelného mikroskopu s výskumom imunohistologická rakoviny prsníka, čo je oveľa lacnejšie, a teda dostupnejšie. Avšak, rádioaktívne prvky (peroxidázu, alkalickú fosfatázu, a fluoresceín), bez ktorej niekedy nevyžadujú špeciálne techniky a je ešte široko používaný.

Nutnosť použitia imunohistochémia u karcinómu prsníka, kontrolovať jeho kvalita a interpretácia výsledkov by mali byť sledované oddelenia patológie. Je dôležité, že údaje získané pri dekódovaní štúdie IHC použiť len v spojení s morfologickú analýzu prsného tkaniva, získané farbenie hematoxylínom a eozín.

Dnes imunohistochémia u karcinómu prsníka je najviac rutinné metódou v morfologických (histopatologických) laboratóriá a použité pre diagnostiku a prognostické účely, ako prediktívne (prediktívne) ukazovateľ sa správajú ako rakoviny prsníka v budúcnosti.

Diagnóza rakoviny prsníka a IHC

Keď patológ vidí pod mikroskopom bioptických materiálu, je konfrontovaný s dvoma základnými diagnostickými úlohy: určiť pôvod nádorových buniek, kde boli (v kanáloch, v lalôčikov, alebo v iných častiach prsníka) a potvrdenie alebo vylúčenie ich inváziu do susednej tkaniva.

Diagnostické IHC markery používané pre rakovinu prsníka

Z prvých dňoch používania v onkológii IHC bola vykonaná hľadanie nových a vylepšených metód použiť existujúce protilátky, ktoré by mohli identifikáciu buniek antigény s vysokou špecifitou a citlivosťou. Tieto markery IHC sú teraz široko používaný objasniť histopatologickým diagnózu rakoviny prsníka:

cytokeratiny

• CK5, CK10, CK14 a CK17 sú cytokeratin bazálnej vrstvou epitelu, myoepitel exprimovaný.
• CK5 / 6 alebo "bazálny cytokeratiny" pomôcť určiť normálne prsné myoepitel rovnako ako laminárne (sekretující).
• 34 12: protilátka pomáha rozpoznať cytokeratiny 1, 5, 10 a 14.

Markery hladkého svalstva

• H-caldesmon. To možno nájsť iba v prsníku duktálny myoepitel, tak to má vysokú špecifickosť.
• Aktínu hladkého svalstva (SMA). Táto protilátka pomáha detekciu aktínu v mikrofilamentah- nízkou špecifickosťou, pretože SMA je detekovaný vo fibroblastoch (v tkanivách, ktoré boli regenerované).
• Myosin ťažkého reťazca hladkého svalstva (SMMHC) - konštrukčný prvok v hladkého svalstva myozínu izoformy SM2. Vyjadrené Myoepiteliální prsníka, má vysokú citlivosť a špecifickosť, ako SMMHC prítomný iba v myoepitel usporiadaných v kanáloch a lalôčikov mliečnej žľazy, ale nie vo fibroblastoch spojivového tkaniva žľazy.
• Calponin - polypeptid 34 kDa, moduluje aktivitu actomyosin. Dobrá citlivosť, ale je prítomný v prsných fibroblastoch spojivového tkaniva.
• P63-p53 homológov - jadrový marker je veľmi citlivé myoepitel.
• CALLA: Endopeptid, ktorá sa vyjadruje v myoepitel.
• P-cadheriadhezívne molekula bunky s vysokou citlivosťou na myoepiteliální buniek normálne prsného tkaniva, - n. To nereaguje s fibroblasty.

iné značky

• E-cadherin - bunková adhézne molekula. To sa používa na odlíšenie duktálny karcinóm "v sutiny" (DCIS) v lobulárna. Karcinóm "v sutiny" (LCIS) - DCIS, obvykle identifikované farbením membrány, na rozdiel od LCIS, v ktorých nie je.
• markery melanómu: S100, Melan-A, HMB45.
• markery lymfocytov: CD20, LCA, CD15, CD30.
• vaskulárny endoteliálny markery: CD31, CD34, faktor VIII, d2-40 (podoplanin).
• markery bunkovej proliferácie: Ki67, MIB-1, PPh3.
• apoptóza markery: Bcl-2 a Bax, Bcl-X.

Príklady použitia IHC riešiť problémy sa vyskytli pri stanovení prsníka patológie

Existuje mnoho situácií, v ktorých imunohistochémia prispieva k formulácii konečného histopatologické diagnózy v materskom patológie:

• Farbenie e-cadherin bunkové membrány odstraňuje lobulárna neoplázia (ALH) a LCIS. Nedostatok farbenie bunkovej membrány uprednostňuje lobulárna nádory.
• Normálne epiteliálne hyperplázia, epitelu atypiu alebo ten či onen DCIS. V benígna hyperplázia môže detekovať reaktivitu na CK5 / 6 a CK14, zatiaľ čo s atypickou hyperplázia a DCIS nie.

Tento micro-invazívny karcinóm, alebo niečo iné? Aplikačný myoepitel markerov je rozhodujúce pre určenie, či sa mikro-karcinóm inváziu (inváziu laminárne vrstvy v myoepitel). Reaktivita fibroblastov, že rozdiel v farbenie buniek, Myoepiteliální farbenie buniek hladkého svalstva ciev môže spôsobiť ťažkosti pri výklade pozorovaného pod mikroskopom. Dve značky myoepitel použité v tejto situácii, napríklad, P63 a SMMHC alebo ASMA alebo calponin.

Čo IHC markery sú použité v diagnostických panelov patológiu prsníka

Sada markerov (diagnostický panel), ktorý je používaný v IHC štúdiách u karcinómu prsníka, do značnej miery závisí na vybavenie laboratória, v ktorej vykonávať imunohistochémia a skúsenostiach lekára vykonávajúci ju. Nižšie sú uvedené odporúčania, ktoré IHC panel by mal byť použité pri prsníka patológie, za predpokladu, jeden z kliniky:

• Myosin ťažké reťazce hladkého svalstva (SMMHC) alebo calponin - citlivé a špecifické markery do cytoplazmy myoepitel;
• Aktínu hladkého svalstva môže byť použitý, ale pri výklade je treba mať na pamäti, že je prítomný v fibroblastov (zápal a jazva);
• P63 je citlivý a špecifický marker pre jadier myoepithelial buniek farbených, ale môže byť prerušovaný. Použitie markeru do cytoplazmy myoepithelial buniek, ako sú SMMHC alebo calponin, by mali byť použité, aby sa zabránilo problémom vo výklade obrazu získaného.

Pri pokuse za účelom stanovenia prítomnosti alebo neprítomnosti myoepitel a P63 by mali byť použité SMMHC alebo calponin.

Úloha imunohistochémia v definícii "výhľadové" a "prediktívne" faktory u karcinómu prsníka

Prognostické faktory poskytujú informácie o možnom správaní karcinómu prsníka v čase diagnózy a sú nezávislé na terapiu. To znamená, že pomocou nich si môžete posúdiť, ako sa bude postupovať rýchlo a rakoviny, v uvedenom poradí, v závislosti na tom, aby rozhodnúť, koľko a spracovanie prednosť v každej situácii.

Na druhej strane, "prediktívne" (predikovať) faktory, poskytnúť informácie, ktoré poskytuje indikáciu pravdepodobnosti odpovede nádoru na konkrétne liečby. Napriek tomu, že prognostické a prediktívne faktory sa môžu usporiadať oddelene v diagnostike a klasifikácii karcinómu prsníka častejšie, že sú obaja prognostické a prediktívne.

Napríklad prítomnosť vysokej expresie HER2. V prípade rakoviny prsníka HER2 pozitívne (veľké množstvo proteínu HER2 v nádoru), trvá agresívny, s počiatkom metastázami do vzdialených orgánov. Avšak v prípade, že nádor obsahuje malé množstvo tohto proteínu (rakovina prsníka HER2 negatívny), nebude reagovať na použitie cieleného lieku Herceptin.

"Bazálna" IHC markery

K dispozícii je divíziou rakovina prsníka v závislosti na tom, ktoré gény exprimujú svoje bunky (profil génovej expresie). Nádory profil, ktorý je charakteristický pre bazálnu alebo myoepitel normálneho prsníka, ukáže prítomnosť "bazálny" markery. Tieto nádory majú zlú prognózu. Vo väčšine z týchto "bazálny" nádorov úplne chýba ER, PR (receptory estrogénu a progesterónu) a proteínu HER2. Oni často metastázovať do mozgu, pľúc.

V súčasnej dobe neexistuje zhoda na imunohistochemické profile (IHC markerov, ktoré by mali byť aplikované), ktorý by jasne definovať "bazálny" kraby. Tieto nádory so zlou prognózou zahŕňa takzvané "triple negatívny karcinóm prsníka", v ktorom nie je ER, PR a HER2, ale vyjadrené bazálnej cytokeratinům 5/6 a 14, epidermálneho rastového faktora (EGFR), a c-kit. Môžu tiež vyjadriť P-cadherinu a často P63.

Existujú podobnosti medzi "bazálny" rakovina prsníka a rakovín, ktoré sú detekované u žien s BRCA1 mutácií.

EGFR je vyjadrená často v "bazálnu" nádorov tak u pacientov s týmito nádormi môžu byť prínosom v liečbe inhibítory EGFR.

IHC markery proliferácie (nádor rýchlosť rastu)

Počet alebo percento mitotických buniek v mitóze, bol dlho považovaný za morfologické "biomarker" zhubného nádoru. Existuje celý rad značiek IHC, ktoré vykazujú proliferačnej aktivitu buniek (počet mitóz):

• Ki67 - antigén, ktorý je exprimovaný v jadrách buniek vo všetkých fázach bunkového cyklu a je užitočný marker bunkovej proliferácie;
• MIB1 - protilátka, ktorá reaguje s Ki-67 v tkanive, alebo formalínom fixovaných parafín;
• PPh3.

IHC markery apoptózy

Apoptóza, alebo, programovaná bunková samovražda "je biomarkerov agresívnych nádorov. apoptotické proteíny môžu byť identifikované pomocou IHC:

• Bcl-2;
• Bax;
• Bcl-X.

Ostatné "výhľadové" markery

• p53. Mutácie v tumor supresorového génu p53 (TP53) detegovaný v 20-30% prípadov karcinómu prsníka. Tieto génové mutácie sú častejšie u žien s dedičnými syndrómami karcinómu prsníka ako ženy sa sporadickú rakovinou. U pacientov s genetickou predispozíciou k rakovine prsníka môže byť doporučená testovanie p53. Detekcia mutácií p53 je tiež považovaný za možný prediktor odozvy karcinómu prsníka na chemoterapiu, ale detekcia proteín p53 imunohistochemicky nádoru, neodráža stav p53 mutácií.
• Topoizomerázy II alfa. Toto je cieľ, na ktorý akcia je zameraná antracyklín - chemoterapeutické liečivá, ktorá sa často používa v liečbe karcinómu prsníka.